Staining Buffer Set转录因子染色缓冲液集的操作方法

1. 准备工作液：

1）工作液D：取1份PF00011-A（Foxp3 / 转录因子固定/破膜浓缩液 4X）和3份PF00011-B（Foxp3 / 转录因子固定/破膜稀释液 1X）进行混合，混匀后备用。

2）工作液F：取1份PF00011-C（流式细胞术破膜缓冲液 10X）和9份超纯水混匀后，制备成流式细胞术破膜缓冲液（1X）备用。

2. 按照Proteintech的细胞表面流式细胞术的实验步骤中说明进行细胞表面染色。（如不需要进行细胞表面染色，略过此步骤。）

3. （表面染色后，洗涤，弃上清）每1 x 10^6/cells的EP管中加入1 mL工作液D，缓慢吹打以确保细胞重悬。在室温下避光孵育45分钟。

4. 在室温下以 400-600g 离心5分钟，弃上清，向EP管中加入2 mL工作液F，缓慢吹打以确保细胞重悬，400-600g 离心5分钟，弃上清。

5. 将细胞沉淀重悬于 100 uL 工作液F中，静置10-15min。

6. 使用抗体推荐用量 如5 uL/Test（或使用工作液F对流式抗体进行预稀释），避光孵育抗体-细胞混合物30-45min，用于检测细胞内抗原。

7. 孵育完毕后，每管中加入2 mL工作液F。

8. 在室温下以400-600g离心试管 5 分钟，然后弃上清。

9. 每管中加入2 mL工作液F。

10. 在室温下以400-600g离心试管 5 分钟，然后弃上清。

11. 将细胞沉淀重悬于加入0.2 mL工作液F中。

12. 在流式细胞仪上采集样品。