细胞培养瓶的使用重点以及注意事项

细胞培养瓶的使用核心在于无菌操作、正确选择瓶盖、精准控制消化时间以及规范操作流程。

‌1. 无菌操作是首要原则‌
所有操作必须在超净台内进行，避免引入外源污染。使用前后需用酒精消毒培养瓶，并确保所有接触细胞的器具无菌。

‌2. 根据培养环境选择瓶盖‌

• ‌透气盖‌：用于CO2培养环境，其透气孔允许气体交换，维持细胞生长所需的pH值。

• ‌密封盖‌：用于普通培养箱或温室，全密封，防止污染。

• ‌摇瓶‌：用于悬浮细胞培养，需搭配摇床使用，工作体积不超过总体积的40%。

‌3. 严格控制消化时间‌
消化贴壁细胞时，加入胰酶后需每隔30秒至1分钟在显微镜下观察，避免消化过度损伤细胞。消化完成后，需用全培养基终止反应。

‌4. 规范操作流程‌

• ‌加液‌：用移液管紧贴瓶壁缓慢加入培养基，避免产生气泡。

• ‌平衡与分布‌：将培养瓶倾斜45度放置，使液体均匀分布，再水平放置并轻轻晃动。

• ‌传代‌：消化后离心，弃上清，用新鲜培养基重悬细胞，按比例分装到新培养瓶中。

• ‌观察‌：每天在显微镜下检查细胞状态，确认无污染且生长良好。