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TECHNICAL ARTICLES康宁重组人层粘连蛋白rLaminin-521是由α5、β2和γ1链组成的异源三聚体,由哺乳动物细胞培养系统表达。rLaminin-521可配合无血清、无动物源培养基,支持人多能干细胞(hPSC)的长期自我更新,包括胚胎干细胞(hESC)和诱导多能干细胞(iPSC)。rLaminin-521培养hPSC 无需添加ROCK 抑制剂,即可进行PSC的单细胞扩增 ,从而降低了hPSC培养的难度,实现有效扩大培养。
主要特点:
重组蛋白,成分明确,安全
包被过程简单
提供基于100μg/管的多种包装规格,方便操作
与多种hPSC培养基和消化试剂兼容,适用范围广泛
支持未分化的hPSC扩增
可用于无异源,化学限定培养条件,方便进行临床转化
人多能干细胞(hPSC)培养
hPSC,包括人类胚胎干细胞和人类诱导多能干细胞,具有无限的自我更新能力和分化潜能。理论上这些细胞可以分化为人体各种细胞类型,从而成为再生医学的细胞和组织的来源。hPSC衍生的细胞也可以用作药物筛选的模型。常规的无饲养层hPSC培养使用团块方式进行传代,因为单细胞培养需要在培养基中额外添加ROCK抑制剂。使用这些化学物质的长期影响尚不清楚。团块传代方法费时费力,不便于扩大培养规模。
形态
在rLaminin-521(人)上的无异源培养基中培养的hESC表现出具有高核质比的特征集落形态。
标志物表达
通过免疫细胞化学染色检测未分化hPSC的标志物,成像分析显示了Oct-4在细胞内的表达(绿色)。同时使用DAPI对细胞核进行了染色(蓝色)。
三谱系分化
在无异源培养基中培养10代,hESC分化为拟胚体(EB)并通过定量RT PCR检测EB中的谱系特异性标志物来评估hESC的多能性。EBs表达3个谱系的标志物,表明细胞在多次传代后保持多能性。
核型分析
在无异源培养基中rLaminin-521上培养的hESC保持正常的核型。在细胞扩增过程中进行了多次核型分析。
在rLamin-521(人)上评估的hPSC细胞系、培养基和解离试剂:
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