Phusion 热启动II高保真PCR聚合酶的优势

产品优势

• 在室温下构建反应
• 反应构建期间无非特异性扩增和引物降解现象
• 借助热启动技术，无需等待即可重新激活
• 高保真度 （52X Taq）
• 延伸时间短 （15-30 s/kb），可实现快速 PCR
• 反应稳健，几乎无需优化
• 可以尽可能少的酶用量实现更高的产物产率
• 可直接上样至凝胶

Phusion 热启动 II 高保真 DNA 聚合酶由 Phusion DNA 聚合酶和可逆结合的特异性 Affibody 配体（可在室温下抑制 DNA 聚合酶活性）混合而成，故在用其扩增时不会产生非特异性产物。Affibody 配体还可抑制聚合酶的 3'→5' 核酸外切酶活性，从而防止在反应构建过程中引物和模板 DNA 降解。在促进聚合酶活性的温度下，配体得到释放，使聚合酶活化。Phusion 热启动 II DNA 聚合酶在高温下立即重新激活，因此不需要在 PCR 方案中单独设置活化步骤。
Phusion Green 热启动 II 高保真 PCR 预混液为方便的 2X 混合物，旨在尽可能减少移液步骤。预混液含有 Phusion 热启动 II DNA 聚合酶、核苷酸和经过优化的反应缓冲液（包括 MgCl₂）。缓冲液还含有一种密度试剂和两种示踪染料，用于 PCR 产物直接凝胶上样。

Phusion Flash 高保真 PCR 预混液和 Phusion Hot Start II 高保真 PCR 预混液有什么区别？

Phusion Hot Start II 高保真 PCR 预混液是一种基于 Phusion Hot Start II DNA 聚合酶的 2X 即用型溶液。它专为最高保真度（52X Taq）和特异性而设计。Phusion Flash 高保真 PCR 预混液基于改良的 Phusion 热启动 II DNA 聚合酶，可实现极短的循环时间，并具有较低的保真度 （25X Taq）。

Phusion Hot Start II 高保真 PCR 预混液中使用哪种缓冲液？

Phusion 热启动 II 高保真 PCR 预混液基于 Phusion HF 缓冲液。为了扩增富含 GC 的靶标，我们建议添加 3% DMSO。

Phusion Hot Start II 高保真 PCR 预混液中的酶浓度是多少？

Phusion Hot Start II DNA 聚合酶浓度经过优化，可在大多数反应中获得良好的结果。当按照说明设置PCR反应时，Phusion酶的最终浓度为50μL反应中的1U（20μL反应中的0.4U）。

Phusion DNA 聚合酶是否添加非模板依赖性 3'-A 突出端？

Phusion DNA 聚合酶产生钝的最终产物;因此，建议进行钝端克隆。如果需要 TA 克隆，可以通过在钝 PCR 产物中添加 A 突出端来进行，例如 Taq DNA 聚合酶 （Cat.不。EP0401）。然而，在添加突出端之前，通过仔细纯化 PCR 产物来去除所有 Phusion DNA 聚合酶非常重要，因为 Phusion DNA 聚合酶中的校对活性非常强。任何剩余的 Phusion DNA 聚合酶都会降解 A 突出端，从而再次产生钝端。

Phusion DNA 聚合酶可以以 1 秒/kb 的速度延伸吗？

是的，这是可能的，尤其是在扩增较小的扩增子时。Phusion DNA 聚合酶的合成能力是 Pfu 的 10 倍。我们建议将 Phusion Flash PCR 预混液的延长时间延长至 15 s/kb。15 s/kb 是一个保守的值，我们可以承诺几乎可以与任何扩增子一起使用。在许多情况下，可以使用明显更短的延伸时间 （0-5 s/kb），而不会影响产量。Phusion Flash DNA 聚合酶与其他快速聚合酶的区别在于，PCR 方案中的所有步骤都可以缩短，包括退火和变性。与任何其他聚合酶相比，这导致了极快的方案。