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BD Pharmingen白细胞活化混合物试剂通过细胞内染色检测细胞因子的细胞内积累的最关键步骤是分离和激活细胞群以诱导产生目标细胞因子。如果没有在蛋白质转运抑制剂存在下培养的适当激活的产生细胞因子的细胞,在大多数情况下检测细胞因子细胞内积累的能力会受到严重损害。据报道,刺激细胞产生细胞因子的各种体外方法。多克隆激活剂对于诱导产生细胞因子的细胞特别有用。这些激活剂包括:伴刀豆球蛋白 A、脂多糖、佛波酯加钙离子载体或离子霉素、植物血凝素、葡萄球菌肠毒素 B 和针对 TCR/CD3 复合物亚基的单克隆抗体(有或没有针对共刺激受体的抗体,如 CD28)。
含BD Pharmingen白细胞活化混合物试剂是一种即用型多克隆细胞活化混合物,含有佛波酯、PMA(佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯)、钙离子载体(离子霉素)和蛋白质转运抑制剂 BD GolgiPlug™ (Brefeldin A)。这种混合物可用于从 T 细胞引发原发性细胞因子反应。使用这种混合物刺激细胞导致细胞因子产生,细胞因子位于产生细胞因子的细胞的粗面内质网中。细胞因子的这种定位是由蛋白质转运抑制剂成分 Brefeldin A 引起的,它阻断了细胞内蛋白质转运过程。因此,细胞中细胞因子蛋白水平积累的增加增强了免疫荧光染色和流式细胞术分析对产生细胞因子的细胞的可检测性。每 100 μL 样品瓶的内容物足以处理多达 50 mL 的细胞培养物(~10^6 个细胞/mL);因此可以刺激 ≥ 5 × 10^7 个细胞。
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