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化学成分明确的iPSC无血清培养基，产品性能良好，细胞连续稳定传代，仍能保持其干性。
本产品用于培养经过重编程诱导成的人多能干细胞(hiPSC)，并能够连续传代，保持其干性。成分明确，培养时不需添加任何额外成分（Y27632除外）。支持隔天补液。本培养基用于培养经过重编程诱导成的人多能干细胞,并能够连续传代,保持其干性。细胞株描述:细胞购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库 (SCSP-1301 ) ,细胞代数为17代。
【产品优势】
1、化学成分明确的无血清培养基，用于hiPSC的体外扩增和长期培养；
2、配方经过科学优化，采用热稳定型细胞因子，缓冲体系更强；
3、支持隔天换液，可实现单细胞传代，操作简便，适用性强；
4、扩增性能更优，支持超过50代的无滋养层培养，细胞核型无异常、无明显分化现象。
【产品性能】
1.复苏后转移至此培养基中能够连续稳定传 35代以上。
2.细胞传代时间为3~ 5 天。
3.细胞表型:TRA-1-60290%, OCT42 95%。
4.细胞形态:
形状: 圆形或椭圆形, 边界清晰, 边缘光滑
厚度:集落呈扁平但略微隆起的二维结构, 中央稍厚。
外观:在显微镜下呈 "鹅卵石 "状, 细胞密集排列。
【产品使用所需要的试剂耗材】
产品名称 | 品牌货号 |
ip sc无血清培养基套装 | YO CON/NC0401 、 NC0401. S |
stem pro TMAc cuta se T M细胞解离试剂 | Thermo/A11 10501 |
ip sc无血清冻存液 | YO CON/NC0603 |
D PBS(不含钙镁离子 ) | YO CON/BS0402 |
DM EM/F12 | YO CON/NC0406 |
Y27632 | M CE/HY-10583 |
Mat riGel | corning/354277 |
另需细胞培养板 /瓶 /皿, 15mL 离心管和移液管等细胞培养耗材。 | |
2.试剂准备
培养基配制 :
温下预温 20~30min, 时间不宜过长, 切勿强光或紫外照射。
ip sc完培养基 2~8℃可避光保存半个月, 由于蛋白在溶液中易降解, 所以最好 1 周内用完。 科研小量、 多次使用时,建议添加剂融化后立即分装 (添加剂出厂后仅允许冻融一次) 。完培养基配制完成后, 减少预温次数,根据需求可提前进行分装。
Mat rigel工作液配制和包被 :
根据康宁的批次报告进行分装。 分装后的小包装可在 -80℃下最多储存6个月。
取出一份基质胶加入到 36 mL 的 DM EM/F12 中, 包被四个 6 孔培养板 (1.5 mL /孔) 。
(1 ) 将一份基质胶从 -80℃取出, 在4℃冰箱中的冰上解冻, 直到成为液体 (同时预冷移液管或枪头) 。
(2)将装有 36mL的 DM EM/F12培养基的离心管插入冰中 (包被过程中保持低温,避免因局部温度过高凝固而影响包被质量) 。
(3) 吸取 1mL预冷 DM EM/F12 加入含有基质胶的小管中, 移液枪吹打混匀 20 次后, 吸入到预冷培养基 (50mL离心管) 中,移液管吹打混匀 20次。
(4) 立即用稀释后的基质胶溶液包被 6 孔板。
(5) 包被后, 需在 37℃细胞培养箱中放置 1小时, 可立即使用。 如果不立即使用,将6孔板用封口膜封好后,放入4℃冰箱中最多储存 7天。 如果基质胶溶液并未全覆盖表面, 则无法实现最佳的 IPSC 培养; 因此, 不建议使用含有溶液已蒸发区域的培养板。
(6) 使用时, 轻轻地将培养板向一个角落倾斜, 吸取包被液上清, 注意不要碰到底面包被好的基质胶。 立即加入培养基和细胞。如果已将培养板在4℃下储存, 在使用之前, 还需将培养板在培养箱 (37℃ )下放置 30~60分钟。
配制Y27632溶液:
Y27632粉末溶解, 配成浓度为 10 mM 的储存液。 分装后冷冻于 -20℃, 6个月 内使用。
Y27632提高复苏和传代后的存活率和克隆形成率, 所以只在复苏步骤和传代步骤添加, 推荐添加的终浓度为 10M,换液后不再添加且换液时长不宜超过24小时。
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