Dynamis™ AGT™ 培养基 1L

我在直接使用Dynamis AGT培养基培养CHO细胞的过程中遇到困难。我该如何处理？

请参考如下的逐步适应步骤：如果您在切换至某一比例时培养时遇到问题，请以前面的比例进行传代2-3次。

1.对培养在含5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基中的CHO细胞进行逐步适应培养时，请使用3×10E5–4×10E5 活性细胞/mL的接种密度。
2.使用Countess自动细胞计数仪监控细胞生长情况，直至活性细胞密度达到≥1×10E6个细胞/mL。
3.按照Dynamis AGT培养基：原始培养基的溶液25：75的比例来稀释细胞。我们推荐以原始比例的培养基培养一份细胞备份，直至新比例的培养基获得成功。在每一次后续传代时，使用比例逐渐增加的DynamisAGT 培养基溶液稀释细胞（Dynamis AGT培养基：原始培养基=25：75,50：50,75：25,90：10，最后是100%的Dynamis AGT培养基）。每一步骤都可能需要数次传代，以获得稳定的生长效果。
4.在100%的Dynamis AGT培养基中几次传代之后，活细胞计数在接种后3-4天内可达到至少2×10E6个细胞/mL，细胞存活率在85%以上。达到这一阶段，我们认为细胞适应了 Dynamis AGT培养基。

Dynamis AGT 培养基（货号 A2617501、A2617502、A2617503、A2617504）推荐哪些饲喂补充剂？

我们建议将 EfficientFeed A+、B+ 和/或 C+ AGT 补充剂与 Dynamis AGT 培养基（货号 A2617501、A2617502、A2617503、A2617504）一起使用，以最大限度地提高滴度。我们建议先尝试 EfficientFeed C+ AGT 补充剂（货号 A2503101、A2503104、A2503105）和 EffiientFeed C+ 2X 补充剂（货号 A3937601、A3937602），如果培养后期比生产力下降，请尝试添加 FunctionMAX 滴度增强剂（货号 A1501001、A1501002）。对于未补充补料补充剂（如 EfficientFeed 补充剂）的培养物，在达到半峰细胞密度之前不应添加补充剂。

注意：在没有补料的情况下培养细胞进行补料分批生产时，我们建议您不要让培养物中的葡萄糖水平低于 2g/L，并根据需要补充葡萄糖

Dynamis AGT 培养基（货号 A2617501、A2617502、A2617503、A2617504）是否需要补充才能使用？

当使用 Dynamis AGT 培养基（货号 A2617501、A2617502、A2617503、A2617504）培养谷氨酰胺合成酶 （GS） 基因表达系统（GS-CHO 表达系统）以外的 CHO 细胞系时，添加 2-8 mM L-谷氨酰胺或等量的 GlutaMAX 补充剂（Cat.建议使用35050079号，35050061）。

注意：我们建议您根据需要补充葡萄糖，以免培养物中的葡萄糖水平低于 2g/L

我无法将我的 CHO 细胞直接适应 Dynamis AGT 培养基。我该怎么办？

请参考下面显示的顺序适应程序。如果您无法超过一定比例，请以之前的比例再传代细胞 2-3 次。

1. 在常规 5-10% 补充血清培养基或其他无血清培养基中生长的 CHO 细胞的顺序适应期间，使用 3 X 10E5-4 X 10E5 活细胞/mL 的接种密度。
2. 使用 Countess 自动细胞计数仪监测细胞生长，直到活细胞密度达到大于或等于 1 X 10E6 个细胞/mL。
3. 使用完整的 Dynamis AGT 培养基与原始培养基的 25：75 比例稀释细胞。我们建议在原始比率培养基中维护备份培养物，直到使用新比率培养基取得成功。在随后的每次传代中，用 Dynamis AGT 培养基与原始培养基的比例逐步增加稀释细胞（25：75、50：50、75：25、90：10，然后是 100% Dynamis AGT 培养基）。每一步可能需要多次传代才能实现持续生长。
4. 在 100% Dynamis AGT 培养基中多次传代后，活细胞计数应在接种培养后 3-4 天内达到至少 2 X 10E6 个细胞/mL，活力率为 ≥85%。在这个阶段，该培养物被认为适应了 Dynamis AGT 培养基。